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快速RNA免核酸提取熒光PCR檢測試劑盒

簡要描述:本試劑盒中采用du特配方,能夠快速高效的裂解各種常見樣本,無需重復離心便可獲得高質量的病毒RNA,適用于TaqMan等熒光標記探針的高特異性檢測。本產品可用于細胞培養液、血液、血清中病毒RNA的提取。5×one step qRT- PCR Mix 試劑中引入了dUTP/UDG防污染系統,可消除擴增污染對qPCR的影響。

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2023-04-27
  • 訪  問  量:1226
詳情介紹

快速病毒RNA免核酸提取熒光PCR檢測試劑

 

試劑盒簡介:本試劑盒中采用du特配方,能夠快速高效的裂解各種常見樣本,無需重復離心便可獲得高質量的病毒RNA適用于TaqMan等熒光標記探針的高特異性檢測。本產品可用于細胞培養液、血液、血清中病毒RNA的提取。5×one step qRT- PCR Mix   試劑中引入了dUTP/UDG防污染系統,可消除擴增污染對qPCR的影響。

 

試劑盒組成

組分

M-DNA01

RNA-Lysis

         1.5 mL      50T

5×one step qRT- PCR Mix

200 μL       ( 50T )

樣品稀釋液

20  ml         ( 50T )

保存-20oC 保存,保存期一年。

注意:使用前將RNA-Lysis室溫充分混勻。

準備的儀器:離心機、移液器、PCR儀

使用方法

一、 樣品的處理方法

1.少量樣本處理方法

1吸取15μL樣本放入1.5ml離心管中。

2)加入25 μL RNA Lysis

3)充分混勻,室溫靜置5分鐘,加入350µL樣品稀釋液混勻。

410,000rpm離心1分鐘,1-2μL作為PCR反應模板。

2.大量樣本處理方法

1分別吸取15μL不同的樣本依次放入8聯管中。

2)加入25 μL RNA Lysis

3)充分混勻,室溫靜置5分鐘,10,000rpm離心1分鐘。

4分別從(3)中吸取10μL處理后樣品依次加入一新的8聯管。

5每孔分別加入90µL樣品稀釋液混勻。取1-2μL作為熒光PCR反應模板。

二、在RNase free 的離心管中配制PCR反應體系

PCR反應體系

20 μL體系(推薦)

5×one step qRT- PCR Mix

4 μL

Forward Primer (10 μM)

0.4-1μL

Reverse Primer (10 μM)

0.4-1 μL

TaqMan Probe

0.4-1 μL

Template RNA

1-2 μL

ddH2O

補足至20 μL

 

三、反應程序

溫度

時間

循環數

55oC

15min

1

95oC

30sec

1

95oC

10sec

 

40-45

60oC

30sec

 

注意事項

1)在進行大量樣品檢測時,可將本試劑盒的試劑預分裝到8 PCR管,用多通道移液器進行多樣本的處理。

2)取樣的細胞量應當適中,濃度不宜過高或過低,處理后溶液應當以透明為宜。擴增病毒基因時需要根據病毒的滴度決定取樣的細胞數量。

3)樣品處理過程中應當防止交叉污染,推薦設置陰性樣品參與處理過程,以檢測環境的污染。

4)PCR的退火溫度可根據引物的預測Tm值減去5℃,或者通過梯度PCR摸索最佳退火溫度。

5)用本試劑盒處理的樣品可于-20℃保存 1個月。

6)為防止試劑盒污染,請勿將不同批號試劑盒混用。


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