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時間分辨熒光微球(羧基)偶聯使用說明書

簡要描述:時間分辨熒光微球(羧基)偶聯使用說明書

1. 保存條件:本產品需要于 2-8℃保存,切勿冷凍;

2. 本產品在使用前確認處于均勻的懸浮狀態,有輕微結塊可以用超聲去除;

3. 本產品活化后建議立即進行偶聯實驗,活化狀態不宜長時間保存;

4. 本產品僅供科研使用。

  • 產品型號:
  • 廠商性質:生產廠家
  • 更新時間:2022-05-24
  • 訪  問  量:1846
詳情介紹

時間分辨微球(羧基)偶聯方法

粒徑: 100nm-300nm

激發/發射:365/610nm

.  微球的清洗

一般取 1mg 微球(10mg/ml) 標記 0.1mg 抗體,不同項目可進行兩邊濃度摸索優化。

具體操作流程如下:

1.100ul 微球 + 900 ul 標記緩沖液50mM MES,pH 6.0或者0.05MPBS,pH 6.0

2.17000rpm,離心 20min,第一遍;

3.去掉上清,用 1000ul 標記緩沖液重懸微球;

4.17000rpm,離心 20min,第二遍;

5.去掉上清,用 1000ul 標記緩沖液重懸微球離心后微球重懸可使用水浴超聲儀,建議功率 500-700W,超聲時長 2-5min,下同,備用。

.  微球的活化

各稱取 20mg NHS  EDC,用標記緩沖液溶解,現用現配,即 20mg/ml NHS  EDC; 20ul NHS,加入到清洗后的微球中,快速混勻;

然后再取 5ul EDC 加入到微球中,快速混勻; 室溫孵育,20-30min。

.  清洗去除殘留 EDC將活化后的微球:

1.17000rpm,離心 20min,第一遍;

2.去掉上清,用 1000ul 標記緩沖液重懸微球;

3.17000rpm,離心 20min,第二遍;

4.去掉上清,用 1000ul 標記緩沖液重懸微球,備用。

IV.  微球與抗體的偶聯

0.1mg 抗體溶解于50mM MES,pH 8.5或者0.05MPBS,pH 8.5 2ml 離心管中,加入活化后的微球,快速混勻后,室溫孵育,3 小時。

.  封閉

配制 20mg/ml  BSA,即稱取 20mg BSA,用終濃度 100mM 乙醇胺溶液充分溶解,備用。

微球標記抗體后,加入 100ul 上述封閉液 BSA,室溫孵育 1 小時。 .  去除未結合的抗體

此步驟目的是通過高速離心的方法去除游離的未結合微球的抗體;

具體流程如下:

1.17000rpm,離心 20min,第一遍;

2.去掉上清,用 1000ul 稀釋液50mM PBS,pH 7.4  50mM Tris,pH 8.0)重懸微球;

3.17000rpm,離心 20min,第二遍;

4.去掉上清,用 1000ul 稀釋液重懸微球,即為抗體-微球標記復合物,4℃放置備用, 如長期保存需加入終濃度為 0.2% BSA 和 0.02% NaN3 溶液。

 

注意事項

1. 保存條件:本產品需要于 2-8℃保存,切勿冷凍;

2. 本產品在使用前確認處于均勻的懸浮狀態,有輕微結塊可以用超聲去除;

3. 本產品活化后建議立即進行偶聯實驗,活化狀態不宜長時間保存;

4. 本產品僅供科研使用。

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